EGFRvIII et de membres pro-apoptotiques de la famille de chaussure femme puma protéines Bcl-2. Comme le montre la figure 1a, la majorité de ces lignées cellulaires co-expriment des taux élevés d'EGFR et de trois protéines pro-apoptotiques, à savoir PUMA, Bax et Bmf. En revanche, ces cellules expriment de faibles niveaux de Bad, Bim et Bok. Pour déterminer si EGFRvIII coexprimait également avec des protéines pro-apoptotiques similaires à l'EGFR, nous avons examiné trois xénogreffes de GBM portant l'EGFRvIII.

EGFR et EGFRvIII coexpriment paradoxalement avec des protéines pro-apoptotiques et interagissent spécifiquement avec PUMA dans le GBM. (A) Expression de EGFR et de protéines pro-apoptotiques dans des lignées cellulaires de gliomes malins humains. Des chaussure fille puma extraits cellulaires totaux isolés de huit lignées de GBM et de deux lignées de cellules AA ont été soumis à un transfert de Western pour déterminer les taux de protéines pro-apoptotiques EGFR et Bcl-2, y chaussure homme puma compris Bad, PUMA, Bax, Bim, Bmf et Bok.

Dans ce contexte, l'EGFR activé à la surface des cellules est endocyté et acheminé vers le RE où il s'associe à Sec61beta, un composant du translocon Sec61, puis est rétrotranslocé du RE au cytoplasme en tant que récepteur non lié à la membrane [37] . Nos résultats dans la Fig. S2 dans Données supplémentaires montrent que PUMA interagit principalement avec la protéine EGFR chaussure puma blanche qui n'est pas associée aux membranes plasmiques.

Ensemble, ces résultats indiquent que l'EGFR et l'EGFRvIII coexpriment de manière paradoxale avec des protéines pro-apoptotiques et interagissent spécifiquement avec PUMA dans le GBM humain.En utilisant une cohorte de 101 gliomes et 12 tissus cérébraux normaux, nous avons examiné les taux d'EGFR / EGFRvIII et de PUMA via l'IHC. Les résultats indiquent une corrélation positive significative entre les niveaux d'expression de EGFR / EGFRvIII et de PUMA (p = 0,039). Comme le montre la figure 2a.

Comme le montre la figure 3a, le test TUNEL a montré que l'inactivation de PUMA rend les cellules U87MG résistantes à l'apoptose (2,5%), induites par des traitements à l'anisomycine pendant chaussure puma foot 48 heures. En revanche, les cellules U87MG transfectées avec l'ARNsi contrôle subissent une apoptose significative induite par l'anisomycine (45,5%). Dans l analyse, les signaux jaunes fusionnés représentent l ADN fragmenté nucléaire.

Effets de la régulation négative de l'expression de PUMA et de l'augmentation de l'expression de EGFRvIII sur l'induction de l'apoptose dans les cellules GBM. L'étendue de l'apoptose est calculée comme suit: (nombre de noyaux apoptotiques) / (nombre total de noyaux). Dans les deux panels, 250 à 300 cellules ont été examinées dans chaque expérience et trois expériences indépendantes ont été menées pour dériver des moyennes et des écarts types.